Finansavimas

Projekto tikslas yra kelti studentų mokslinę kvalifikaciją vykdant praktinę mokslinę veiklą ir pritaikant genų inžinerijos ir molekulinės biologijoss teorines žinias praktikoje konstruojant mielių S. cerevisiae dolicholio kinazės (DK) mutantus panaudojant CRISPR-Cas9 sistemą ir įvertinant įvestų pakeitimų poveikį baltymų glikozilinimo bei sekrecijos procesams. Kadangi baltymų sekrecija yra esminis gyvų organizmų procesas, kurio pagrindiniai etapai yra panašūs mielių ir žinduolių ląstelėse, mielių baltymų sekrecijos tyrimai yra svarbūs tiek norint geriau eukariotų baltymų sekrecijos mechanizmus, tiek ir kuriant ypač dideliu baltymų sekrecijos efektyvumu pasižyminčius mielių kamienus. Baltymų glikozilinimas arba fermentinis polisacharidų prijungimas prie baltymų aminorūgščių yra glaudžiai susijęs su baltymų sekrecija. Šios praktikos metu gauti rezultatai svarbūs vieno iš esminių glikozilinimo fermentų - dolicholio kinazės (DK), kurią koduoja SEC59 genas, tyrimams. Kadangi kai kurių homologinių baltymų veikimas ne tik skirtinguose organizmuose, bet net ir skirtingose mielių rūšyse gali įtakoti skirtingus sekrecijos fenotipus S. cerevisiae bus naudojamos kaip modelis įvertinant žmogaus, nematodų ir K. lactis DK sugebėjimą komplementuoti S. cerevisiae DK funkcijas. Sukonstruotų mielių mutantų chromosomose SEC59 geno koduojanti dalis CRISPR-Cas9 sistemos pagalba bus pakeista žmogaus, nematodų ir K. lactis DK koduojančiais fragmentais. Toliau bus tiriamas šių mutantų CPY glikozilinimo lygis, ląstelės sienelės struktūros pokyčiai bei α-amilazės sekrecijos efektyvumas. Praktikos metu bus naudojami įvairūs genų inžinerijos ir molekulinės biologijos metodai, todėl įgytos kompetencijos padės studentui tolesnėse studijose geriau įsisavinti teorines žinias ir ruošiant magistrinį darbą. Be to, gautos naujos žinios apie skirtingų organizmų DK savybes prisidės prie glikozilinimo bei sekrecijos procesų skirtumų atskleidimo skirtingų mielių rūšių, nematodų ir žmonių ląstelėse.