Finansavimas

Kvėpavimo takų remodeliacija yra esminis astmos patofiziologinis požymis. Manoma, kad vienas iš svarbiausių koreguotinų veiksnių galėtų būti užląstelinio užpildo baltymų, bei už jų produkciją atsakingų molekulinių signalinių kelių aktyvumo reguliavimas. Tyrimo idėja: po eozinofilų poveikio sutrikusi užląstelinio užpildo baltymų apykaita, tiek autokrininiu būdu keičia pačių baltymus išskyrusių ląstelių fiziologinį aktyvumą, tiek ir parakrininiu būdų jas supančių kitų strukrūrinių ląstelių bei naujai į kvėpavimo takus migravusių eozinofilų aktyvumą sergant astma. Išsikeltas tikslas: įvertinti eozinofilų įtaką bronchų lygiųjų raumenų ląstelių bei plaučių fibroblastų užląstelinio užpildo baltymų produkcijai bei šių baltymų įtaką eozinofilų adhezijai bei struktūrinių ląstelių proliferacijai sergant astma. Tikslui įgyvendinti suformuluoti uždaviniai:1) ištirti eozinofilų poveikį plaučių fibroblastų ir BLR ląstelių užląstelinio užpildo baltymų produkcijai sergant astma;2) nustatyti tiesioginį užląstelinio užpildo baltymų poveikį plaučių fibroblastų ir BLR ląstelių proliferacijai;Tyrėjas įgis patirties atliekant šias metodines priemones:• Eozinofilų išskiriamą iš tiriamųjų periferinio kraujo, pritaikant centrifugavimą aukšto tankio gradiente ir magnetinę separaciją;• Plaučių struktūrinių ląstelių auginimą in vitro;• Eozinofilų adhezijos vertinamą matuojant eozinofilų peroksidazės aktyvumą; • mRNR mėginių surinkimą genų raiškos tyrimams;• Užląstelinio užpildo baltymų genų raiškos vertinimą pritaikant tikrojo laiko polimerazinės grandininės reakcijos analizę;• Kiekybinį užląstelinio užpildo baltymų vertinimą imunofluorescenciniu mikroskopu po atitinkamo žymėjimo fluorescenciniais antikūnais;• Fibroblastų ir BLR ląstelių proliferacijos analizė praėjus 72 val. nuo kombinuotų kultūrų sudarymo pražios pritaikant Alamaro mėlio metodą.