Finansavimas

Restrikcijos endonukleazės – laboratorijose naudojamos DNR molekulinės žirklės, atrastos bakterijų ir archėjų antivirusinėse sistemose. Mūsų skyriuje yra tiriama unikali I tipui priskiriama CglI restrikcijos-modifikacijos sistema iš Corynebacterium glutamicum. CglI R-M sistema yra sudaryta iš trijų polipeptidų: 5mC metiltransferazės, endonukleazės (R-subvieneto) ir DEAD šeimos helikazės/ATPazės (H-subvieneto arba H.CglI). Šios sistemos restrikcijos endonukleazė – R- ir H-subvienetų kompleksas (R2H2), kurio DNR kirpimo mechanizmas skiriasi nuo kitų nuo ATP priklausomų REazių. Mūsų skyriuje buvo nustatyta homologiškos sistemos NgoAVII R-subvieneto struktūra, o H-baltymo tretinė struktūra dar nėra žinoma. Siekiant nustatyti H-subvieneto struktūrą, buvo kristalinami H-subvienetai iš homologinių sistemų ir pavyko gauti H.LdeI baltymo iš Lactobacillus delbrueckii kristalus, difraguojančius rentgeno spindulius pakankama skiriamąja geba. Projekto tikslas yra paruošti eksperimentiniam struktūros nustatymui rentgenostruktūrinės analizės metodu reikalingus H.LdeI kristalus, modifikuotus sunkiaisiais atomais. Modifikavimui yra pasirinkti du metodai: seleno metioninu in vivo modifikuoto baltymo raiška ir kristalinimas bei natyvių H.LdeI kristalų mirkymas įvairiuose sunkiųjų atomų junginiuose. Projekto metu gauti kristalai vėliau bus panaudoti H.LdeI struktūros nustatymui, kas leis patikslinti turimą kompiuterinį H.CglI modelį ir sudarytų prielaidas detaliam R2H2 komplekso veikimo mechanizmo išaiškinimui.