Finansavimas

Literatūroje aprašytas žmogaus karboanhidrazių (CA) slopinimo sulfonamidais mechanizmas, kurio metu slopiklio sulfonamidinė grupė koordinuoja su CA aktyviajame centre esančiu kataliziniu Zn(II). Tuo tarpu mūsų skyriuje gauti kristalografiniai duomenys apie žmogaus CA XIII sąveiką su dviem fluorintais benzensulfonamidais, orto ir para padėtyje turinčiais pakaitus, rodo, kad skirtingai nei klasikinių sulfonamidų jungimosi su CA atveju, šių junginių sulfonamido grupė nesąveikauja su CA XIII kataliziniame centre esančiu Zn(II) (dr. Aleksejaus Smirnovo duomenys). Norėdami išsiaiškinti, ar nespecifinis CA XIII jungimasis su kai kuriais sulfonamidiniais junginiais yra nulemtas šios karboanhidrazės aktyviojo centro ypatybių, ar tai tik kristalinimo artefaktas, šios praktikos metu planuojama atlikti mutagenezę: CA XIII aktyviame centre esantį valiną pakeistį į treoniną (V201T), esantį klasikiniu būdu ir silpniau su slopikliais besijungiančios CA II aktyviajame centre, o CA II treoniną į valiną (T199V), esantį CA XIII aktyviajame centre. Tikimasi, kad šie amino rūgščių pokyčiai pakeis izoformų jungimosi su sulfonamidiniais slopikliais būdus: slopikliai su CA XIII V201T mutantiniu baltymu ims jungtis silpniau ir klasikiniu būdu, sulfonamidinei grupei sąveikaujant su Zn(II), o su CA II T199V - stipriau ir nespecifiškai. Mutacijų nulemti izoformų jungimosi su slopikliais pasikeitimai bus įvertinti palyginus mutantinių ir nemutantinių izoformų sąveikas su fluorintais benzensulfonamidiniais junginiais, turinčiais pakaitus skirtingose padėtyse, išmatuojant baltymo-ligando disociacijos konstantas (Kd) fluorescensiniu terminio poslinkio metodu (FTSA). Atlikdama šią mokslinę praktiką studentė įgaus praktinės mokslo tiriamojo darbo patirties, išmoks planuoti eksparimentus, vertinti savo rezultatus bei juos pristatyti. Praktikos metu gauti rezultatai bus panaudojami tolimesniems kristalografiniams CA XIII sąveikos su ligandais tyrimams.